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摘要：佐劑（Adjuvant）又稱免疫調(diào)節(jié)劑或免疫增強(qiáng)劑（Immunepotentiator），是作為疫苗的一種添加劑實力增強，當(dāng)它先于抗原或與抗原混合注入機(jī)體后質生產力，能夠增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或者改變免疫反應(yīng)的類型，屬于非特異性的免疫增強(qiáng)劑，而其本身無抗原性開拓創新。理想的佐劑不僅能夠增強(qiáng)免疫反應(yīng)，而且能使機(jī)體獲得最佳的保護(hù)性免疫明確了方向。乳佐的均一性和穩(wěn)定性是非常重要的兩個(gè)考察項(xiàng)去完善，而與此直接相關(guān)的是粒度的控制^[1]。

最近發(fā)布在Nature的文章表明必然趨勢，對(duì)MF59而言項目，平均粒徑在160nm（MF59）左右效果比較佳^[2]，粒徑過大及過小效果都欠佳重要方式。此外，小顆粒濃度（如＜100nm）及大顆粒濃度（如＞1.2μm）過高均影響最后的藥效且?guī)砀弊饔梦：ο嘭炌?。因此增產，除?duì)平均粒徑控制外，“過大"系統，“過小"顆粒濃度控制也非常重要的方法。值得注意的是，在實(shí)際應(yīng)用中方法，產(chǎn)品穩(wěn)定性指標(biāo)是一個(gè)非常重要的考察項(xiàng)生產創效，用于快速篩選配方及優(yōu)化工藝。

關(guān)鍵詞：佐劑進行探討；疫苗緊密協作；乳佐；平均粒徑管理；顆粒濃度

乳佐的常規(guī)制備方法為：制備水相、油相切實把製度，經(jīng)過混合優化上下、剪切步驟形成初乳，初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機(jī)均質(zhì)最新，而后除菌過濾得到乳佐發揮重要作用。初乳、均質(zhì)后乳液適應能力、除菌過濾后乳液通過PSS的Nicomp粒度分析儀測(cè)試平均粒徑設施、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器測(cè)試過大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀快速篩選乳佐配方穩(wěn)定性就此掀開。另通過Lumispoc檢測(cè)過小顆粒濃度能力。

圖1 乳佐解決方案圖示

以MF59為例總之，國際廠家在其乳佐制備上長足發展，對(duì)粒徑進(jìn)行嚴(yán)格控制紮實做，控制初乳、微射流均質(zhì)后乳液規模設備、除菌過濾后乳液的平均粒徑及大于1.2μm的油滴濃度^[2][3]支撐作用。

PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)（小試兼中試型）采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔，通過電液傳動(dòng)的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道至關重要，物料流在此過程中受到高剪切力著力提升、高碰撞力、空穴效應(yīng)等物理作用建設項目，使得平均粒徑降低動手能力、體系均一穩(wěn)定，由此獲得理想的均質(zhì)傳遞、分散或乳化結(jié)果充分。

圖2 高壓微射流均質(zhì)機(jī)器外觀

• 最高2069 bar的均質(zhì)壓力，最高處理量20L/h （PSI-20）

• 采用特殊設(shè)計(jì)Y型腔的發生，去除尾端大顆粒效果佳融合，物料的混合更均一，處理效率高

• 屏顯界面相結合，數(shù)據(jù)可溯源：支持?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)出設(shè)定壓力及實(shí)時(shí)壓力提升、監(jiān)測(cè)點(diǎn)溫度、實(shí)時(shí)流量相關性、時(shí)間等

• 配置K型熱電偶：可用于實(shí)施監(jiān)測(cè)料液溫度

• 低噪音：運(yùn)行音量低于70分貝競爭力，工作環(huán)境友好型

乳佐的粒度對(duì)其免疫效果起到很大的作用的必然要求，整體平均粒徑過大過小都不利于乳佐的免疫效果技術節能，以MF59為例，一般平均粒徑在160nm 左右效果比較佳發展基礎。其平均粒徑不宜過大延伸，相比于微米級(jí)別的液滴，納米級(jí)別的乳佐更易于無菌過濾推進高水平，耐受性良好開展面對面，比更大的微米級(jí)W/O乳液佐劑具有更好的免疫原性和穩(wěn)定性。但平均粒徑過小不斷發展，則會(huì)降低其在肌肉中的停留時(shí)間便利性，導(dǎo)致從注射部位排除更快地排除，從而降低了藥物效果非常重要，因?yàn)檩^小的顆粒比較大的顆粒更容易通過細(xì)胞內(nèi)間隙外滲實事求是，并更快地到達(dá)淋巴結(jié)。因此，平均粒徑需在合適范圍內(nèi)結構。

Nicomp系列納米激光粒度儀采用動(dòng)態(tài)光散射原理檢測(cè)分析樣品的粒度分布空間廣闊，基于多普勒電泳光散射原理檢測(cè)ZETA電位。

圖五 微射流均質(zhì)原理圖

• 粒徑檢測(cè)范圍0.3nm-10μm效果，ZETA電位檢測(cè)范圍為+/-500mV

• 搭載Nicomp多峰算法，可以實(shí)時(shí)切換成多峰分布觀察各部分的粒徑。

• 高分辨率的納米檢測(cè)服務水平，Nicomp納米激光粒度儀對(duì)于小于10nm的粒子仍然現(xiàn)實(shí)較好的分辨率和準(zhǔn)確度線上線下。

圖4 高斯粒徑分布圖

圖5  多峰粒徑分布圖

乳佐常規(guī)的平均粒徑一般為亞微米級(jí)別或納米級(jí)別能力建設，但是微米的乳粒往往大量存在知識和技能，這些尾端大粒子的存在往往會(huì)吸附小顆粒，影響乳佐的穩(wěn)定性醒悟，分析尾端大粒子濃度和數(shù)量協同控製，可以評(píng)價(jià)當(dāng)前配方和工藝的情況并做出相應(yīng)的優(yōu)化。USP729規(guī)定乳劑中大于5μm的乳粒(PFAT5)體積占比不得超過0.05%高效利用，但目前還未有藥典對(duì)乳劑中的下限進(jìn)行規(guī)定，這并不意味著小粒子無需關(guān)注去突破。如果過小顆粒濃度過多品質，如低于100nm，幾十納米左右，那么注入體內(nèi)后可以穿過人體內(nèi)大部分細(xì)胞屏障能運用，到達(dá)的人體部位更多更廣，由此造成的毒副作用會(huì)增加參與水平。

圖6 AccuSizer A7000系列

• 檢測(cè)范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）

• 0.01μm的超高分辨率真諦所在，AccuSizer系列具有1024個(gè)數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異結構不合理，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航

• 靈敏度高達(dá)10PPT級(jí)別提供深度撮合服務，即使只有微量的顆粒通過傳感器，也可以精準(zhǔn)檢測(cè)出來

圖7 LumiSpoc 單粒子顆粒計(jì)數(shù)器儀器外觀

• 快速競爭力、直接測(cè)試穩(wěn)定性最為突出，無需稀釋，溫度范圍寬廣

• 可同時(shí)測(cè)8個(gè)樣品特點，測(cè)量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)

• 加速離心，最高等效2300倍重力加速度

穩(wěn)定性是評(píng)估藥物的常規(guī)項(xiàng)意見征詢，乳佐穩(wěn)定性影響存放時(shí)間和有效期組成部分，穩(wěn)定性較差的乳佐不僅會(huì)增加運(yùn)輸儲(chǔ)存成本，還有可能增加用于人體使用的風(fēng)險(xiǎn)。在乳佐制備中高效化，控制尾端大粒子數(shù)量和濃度能使乳佐更為穩(wěn)定大大提高，國外某公司的重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)了＞1.2μm的液滴濃度^[3]，因?yàn)檫@部分液滴濃度過高規劃，會(huì)凝聚或者聚結(jié)關規定，從而導(dǎo)致乳液不穩(wěn)定。

圖8 LUM穩(wěn)定性分析儀

• 快速應用前景、直接測(cè)試穩(wěn)定性可能性更大，無需稀釋，溫度范圍寬廣堅定不移。

• 可同時(shí)測(cè)8個(gè)樣品積極拓展新的領域，測(cè)量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)。

• 加速離心進入當下，最高等效2300倍重力加速度建強保護。

微射流處理后的乳液經(jīng)過適當(dāng)?shù)臑V芯過濾工藝首次。過濾可去除前置工藝流程中的大油滴流動性，這部分油滴雖然數(shù)目很少，但這些油滴體積占比較大生產效率，且極易成為聚集的成核位點(diǎn)反應能力，吸附更多的小液滴，導(dǎo)致儲(chǔ)藏過程中乳液穩(wěn)定性降低^[4]提供有力支撐。濾膜的材質(zhì)將影響過濾后的效果管理，綜合考量物理攔截，吸附攔截等效果越來越重要，選擇適配的濾膜材質(zhì)用于過濾切實把製度，此外，還需結(jié)合乳液配方考慮相容性穩(wěn)定改革創新。

Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業(yè)最新，專業(yè)從事MCE、Nylon自行開發、PES敢於挑戰、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)應用擴展，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶經(jīng)驗(yàn)過程中，并為全球生物制藥、醫(yī)療器械建立和完善、食品飲料特征更加明顯、實(shí)驗(yàn)室分析、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。

Entegris與Anow的結(jié)合估算，引入Entegris質(zhì)量管理體系，每一支濾芯都經(jīng)過嚴(yán)格檢查達到，此外深入各系統，新建成的CTC驗(yàn)證中心，為全球客戶提供專業(yè)的驗(yàn)證服務(wù)的可能性。

參考文獻(xiàn)

[1] The droplet size of emulsion adjuvants has significant impact on their potency, due to differences in immune cell-recruitment and activation.

[2]  WO 2011/067669

[3]  諾華：疫苗佐劑制備中的親水過濾

[4]  WO 2011/067669