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納米顆粒跟蹤分析技術(shù)為外泌體表征開拓新途徑

  更新時間:2015-08-06 點擊量:3729

    外泌體早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中道路,是細(xì)胞主動分泌首要任務,大小較為均一增持能力,直徑為30~100納米效率,密度1.10~1.18 g/ml的囊泡樣小體競爭力。隨著分子技術(shù)的不斷發(fā)展的特性,生物學(xué)界對外泌體的探索日趨深入深入。2013年體系流動性,三位國外科學(xué)家因在細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的研究上取得關(guān)鍵性突破的必然要求,被授予諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎的過程中。由此,外泌體的研究達(dá)到了一個的高度狀況。

  而近年來範圍和領域,越來越多的證據(jù)顯示出外泌體對臨床治療的重要價值。外泌體是細(xì)胞間信使業務,通過其數(shù)量和生物化學(xué)組成的變化,可為進(jìn)一步的臨床診斷提供有力的證據(jù)。它攜帶多種蛋白質(zhì)和miRNA非常完善,參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)傳遞、細(xì)胞遷移、血管新生和腫瘤細(xì)胞生長等過程非常重要,并且有可能成為藥物的天然載體實事求是,應(yīng)用于腫瘤檢測或臨床治療。

  但目前國內(nèi)在外泌體研究方面的經(jīng)驗十分有限行動力,無論是離心法結構、過濾離心還是免疫磁珠法,都無法同時外泌體的含量、純度以及生物活性效果。這首先就制約了外泌體樣本的制取,進(jìn)而對后續(xù)的表征造成困難。而測量技術(shù)的局限性也極大地阻礙了外泌體在這些領(lǐng)域的研究進(jìn)展服務水平。

  在當(dāng)前中國市場主流的外泌體表征方法中線上線下,研究人員的選擇一般有電子顯微鏡、流式細(xì)胞儀和動態(tài)光散射技術(shù)能力建設。但電子顯微鏡一次只能觀測數(shù)量有限的顆粒知識和技能,在代表性上存在嚴(yán)重不足,同時醒悟,由于電子顯微鏡的樣本制備過程比較復(fù)雜進行部署,因此很容易造成樣本的形態(tài)、狀態(tài)發(fā)生改變新模式;流式細(xì)胞儀目前*的測量顆粒粒徑下限為300nm左右重要作用,大大超過了外泌體的粒徑上限;而動態(tài)光散射技術(shù)不適合多分散的復(fù)雜外泌體樣本的測量應用情況,且無法得出樣品中外泌體的濃度很重要。

   的質(zhì)控作用

  外泌體的提取一直以來都是橫亙在所有相關(guān)研究者面前的一道難題。生物細(xì)胞中的囊泡種類繁多也逐步提升,怎樣證明提取的顆粒一定就是外泌體呢保護好?電子顯微鏡在鑒定一定數(shù)量的顆粒屬性方面固然有效,但如前所述講理論,電子顯微鏡不適合對顆粒進(jìn)行快速分析有望,而動態(tài)光散射技術(shù)又只能對分布相對均一的樣本顆粒進(jìn)行檢測,并且不具備熒光功能解決問題。

  同時深刻內涵,研究人員還可以利用熒光標(biāo)定重點的特定外泌體顆粒,從四種不同波長——405nm最為突出、 488nm逐步改善、 532nm和635nm——的激光器中選擇一款,搭配相應(yīng)的濾光片,從而實現(xiàn)對熒光樣品的測量落實落細,再由NTA技術(shù)對其進(jìn)行單獨檢測,免受復(fù)雜樣本(如血清組成部分、尿液等)環(huán)境的影響深入闡釋。對復(fù)雜樣品的分辨能力對于像外泌體這樣的研究對象來說至關(guān)重要。

  尤為關(guān)鍵的是高效化,由于NTA的工作原理是通過將一束能量集中的激光穿過玻璃棱鏡對樣品(懸浮顆粒的溶液)進(jìn)行照射大大提高,配以玻璃表面鍍鉻使背景信號小化新的動力,可讓研究人員通過顯微鏡直接觀察到納米顆粒在溶液中的布朗運(yùn)動,并拍攝影像調整推進,對每個顆粒的布朗運(yùn)動進(jìn)行追蹤和分析為產業發展,快速地計算出樣本中納米顆粒的流體力學(xué)半徑和濃度。相對于其他傳統(tǒng)技術(shù)發展契機,NTA能對懸浮液中粒徑范圍為10nm-2000nm的顆粒進(jìn)行表征穩定,并且兼具*的分辨率,對于粒度較為接近的顆粒仍然可以分析齊全,特別適用于外泌體廣泛關註、蛋白質(zhì)聚集、藥物傳輸機製、納米顆粒毒理服務好、病毒和疫苗等復(fù)雜體系的相關(guān)研究。

  操作簡便流動性、工作效率高

  通常,大型儀器(如流式細(xì)胞儀)在使用前都需要進(jìn)行復(fù)雜的預(yù)熱和校準(zhǔn)準(zhǔn)備生產效率。并且由于NTA技術(shù)采用的是斯托克斯-愛因斯坦方程的計算反應能力,所提供的是一個無關(guān)質(zhì)量、折光度和顆粒材料的流體力學(xué)直徑競爭激烈,因此儀器可跳過繁瑣的校準(zhǔn)直接進(jìn)入研究分析投入力度,為工作人員節(jié)省研究前的時間。

  作為一種集成程度和自動化程度都非常高的儀器學習,還整合了顆粒檢測功能與納米顆粒分析技術(shù)切實把製度,為納米顆粒表征提供易于使用的可重復(fù)平臺。40cm x 25cm的設(shè)備主機(jī)集成了超高靈敏度科研級sCMOS光電傳感器改革創新、溫控單元和一個具有四種可選波長的激光最新。樣品池和激光模塊也能輕易的拆卸和組裝,便于移動自行開發、清潔模樣,適合高通量檢測。強(qiáng)大的軟件分析能力讓馬爾文NS 300在極短的時間內(nèi)就能繪制出粒徑—對應(yīng)數(shù)量分布強(qiáng)度—顆粒散射光強(qiáng)的三維圖譜處理方法,并得出與各種粒徑顆粒有關(guān)的信息數據顯示。這樣不僅減少了人為操作失誤的概率,更大大提高了研究人員的工作效率服務。

  增值服務(wù)保障產(chǎn)品*狀態(tài)

  作為顆粒物表征技術(shù)的市場實現,除了技術(shù)創(chuàng)新,也一貫注重客戶服務(wù)舉行,其技術(shù)團(tuán)隊人數(shù)是銷售團(tuán)隊的3倍,涵蓋了學(xué)術(shù)級不容忽視、應(yīng)用和服務(wù)工程師等,他們會參與客戶的研究工作達到,深入了解客戶需求深入各系統,為其提升產(chǎn)品價值。

  總結(jié)與展望

   雖然外泌體作為生物標(biāo)志物的研究在國內(nèi)尚處于起步階段的可能性,但它在臨床治療領(lǐng)域已顯現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摿M一步推進。在臨床診斷中,簡單快速地在復(fù)雜生物背景下測量外泌體濃度系列、粒徑是*要求明確相關要求,目前存在的方法都無法地解決這一問題。NTA作為一項的測量技術(shù)方案,具有實時觀測和熒光測量功能特點,能夠以較高的分辨率,地測量顆粒濃度統籌發展,從而為外泌體大小和濃度研究提供新的思路品質。而隨著越來越多科研機(jī)構(gòu)與研究項目成果的進(jìn)一步披露。

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